Прямое секвенирование ДНК
Прямое секвенирование продуктов ПЦР является эффективным и чувствительным методом выявления мутаций. С помощью прямого секвенирования одноцепочечных и двухцепочечных продуктов ПЦР стандартными методами можно обнаруживать до 99% мутаций при минимальном количестве ложноположительных и ложноотрицательных результатов. Метод позволяет не только точно локализовать мутацию в исследуемой последовательности нуклеотидов, но и определить ее тип и возможный механизм возникновения с учетом контекста окружающих ее нуклеотидов.
Современные методики позволяют определить последовательность не более чем из 300-400 нуклеотидов, поэтому прямое определение нуклеотидной последовательности информативно только в тех случаях, когда большинство мутаций находятся на одном небольшом участке. Этот метод позволяет выявить новые мутации и редко дает ложноотрицательные результаты. Порой вызывает сложности трактовка впервые обнаруженных миссенс-мутаций, которые могут быть как отражением бессимптомного полиморфизма белков, так и причиной болезни. Последнее особенно вероятно, если в семье наблюдается однозначное соответствие между наличием мутации и симптомами болезни или произошла замена консервативной аминокислоты, особенно в функционально значимой области белка. Данный метод является наиболее важным для точного определения мутации при генетической диагностики почти всех глазных болезней 
Типы генетической диагностики в офтальмологии:
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Кариотипирование |
флюоресцентная гибридизация in situ, Fluorescence in situ hybridization |
Спектральный кариотип spectral karyotype |
SSDGE в генетике - single-strand DNA gel electrophoresis (электрофорез в геле одноцепочечной ДНК) |
DGGE - denaturing gradient gel electrophoresis денатурирующего градиентного гель-электрофореза |
анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов Restriction Fragment Length Polymorphism |
Специфичный микрочип |
Типичный микрочип |
Прямое секвенирование |
|
