Материалом для проведения ДНК-анализа может быть любая ткань человека, содержащая ДНК. Удобно брать образцы жидкой венозной или артериальной крови, образцы сухой крови на фильтре или марле, плодный материал. Каждый образец должен быть разборчиво подписан с указанием ФИО человека, у которого взят образец (пробанд), дата рождения, его статуса и степени родства (Иванов Иван Иванович, 09.01.2012 г.р., пробанд; Иванова Мария Ивановна 20 мая 1978 г.р., мать пробанда). Пробирки разборчиво подписывают, образец сухой крови на фильтре - на предмете носителя, в области, где не будет пятна крови; образец сухой крови на марле - на конверте, в котором этот образец будет храниться, либо на листе бумаги, который прикрепляют к марле. К каждому образцу должно прилагаться направление с описанием диагноза и родословной.
Венозная или капиллярная кровь
Самым удобным для получения и анализа биологическим материалом является цельная венозная или капиллярная кровь. Образцы собирают в пробирку с антикоагулянтом. Забор крови для ДНК исследования может производиться в любое время суток вне зависимости от приема пищи. Для исследования должна быть предоставлена венозная кровь в объеме 1 - 5 мл. Забор крови должен осуществляться в специальные пробирки, содержащие раствор антикоагулянта (0,5М раствор ЭДТА, рН 8,0, цитрат натрия и др., кроме гепарина). Соотношение объема ЭДТА к объему крови не должно превышать 1:10. После забора крови пробирка должна быть закрыта пробкой и плавно несколько раз перевернута вверх дном, чтобы кровь в пробирке тщательно перемешалась с антикоагулянтом. Если образец будет предоставлен в лабораторию в течение 2-3 дней, то хранить его следует при температуре +4oС (например в холодильнике). Для более длительного хранения образец следует заморозить и транспортировать на ледяной бане (например в термосе со льдом).
Пятна крови на фильтровальной бумаге или стерильной марле
Стерильную марлю, сложенную в несколько слоев (4 и больше), или фильтровальную бумагу (участок, которого не касались руками) пропитывают кровью из пальца насквозь, чтобы получилось пятно диаметром не менее 2 см. Для увеличения достоверности исследования лучше получать 2-3 пятна крови. Затем образец должен быть высушен на воздухе в течение не менее 2 часов в условиях отсутствия прямых солнечных лучей и контакта с какой бы то ни было поверхностью. Недопустимо также никому, кроме исследуемого пациента, прикасаться к пятну крови или предмету, на который нанесен образец крови, в том месте, где будет пятно крови до его получения во избежании контаминирования и получения неверных результатов. После высыхания образец должен быть упакован в индивидуальный бумажный конверт. Образец хранится при комнатной температуре, избегать попадания влаги.
Для выполнения анализа требуется взять у пациента только 4 капли крови. Этот тест может быть выполнен вместе с другими стандартными анализами крови. Можно использовать капиллярную или венозную кровь (можно добавлять антикоагулянты ЭДТА или ACD, гепарин применять нельзя!).
У пациентов, находящихся на диализе, важно взять образец крови до сеанса диализа. Кровь, взятая во время или после сеанса диализа, не может быть использована для анализа.
Не используйте йодсодержащие дезинфицирующие средства.
Нанесите только одну каплю крови на каждый круг. Убедитесь, что кровь покрывает всю площадь круга и растекается по обе стороны фильтровальной бумаги.
Взятие образцов крови у пациентов
в возрасте менее 6 месяцев.
Согрейте место взятия крови. Очистите поверхность дезинфицирующим средством. Высушите стерильной марлей. Проколите кожу пятки стерильным ланцетом. Вытрите первую каплю крови с стерильной марлей. Дождитесь, пока сформируется вторая большая капля крови. Слегка коснитесь капли крови центром первого круга на фильтровальной бумаге. Дождитесь, пока кровь пропитает и полностью заполнит круг с первого раза. Нанесите кровь только на одну сторону фильтровальной бумаги. Не помещайте в один круг более одной капли крови.
Неправильная подготовка образцов может привести к ложноположительным результатам и даже отбраковке при тестировании. Удостоверьтесь, что кровь покрывает всю площадь круга.
Неправильно: (а) недостаточно крови, чтобы пропитать обе стороны, (б) дезинфектант не высох в момент взятия крови, (в) несколько капель нанесены одна поверх другой.
Пренатальная диагностика
Пренатальная диагностика проводится на забранном специалистами акушерами-гинекологами и предоставленном в лабораторию биологическом материале плода: ворсинах хориона, амниотической жидкости или пуповинной крови. Для исключения загрязнения плодного материала материнскими клетками необходимо предоставление биологического образца беременной женщины. В качестве плодного материала для проведения пренатальной диагностики используют либо биоптат ворсин хориона (при сроке беременности от 8 до 14 недель), либо амниотическую жидкость (на сроке от 16 до 21 недели). После 21 недели исследуют кровь плода, полученную методом кордоцентеза. Биоптат ворсин хориона, помещенный в специальную среду, должен представлять собой видимый глазом кусочек ткани, отмытый от материнской крови и отделенный от материнской части ворсин. В противном случае заражение плодного материала материнской ДНК не позволит правильно провести анализ. Флакон с плодным материалом должен быть подписан фамилией матери, у которой произведена пункция, а также необходимо приложить направление, в котором четко указать фамилию больного, диагноз, кем направлен, а также нарисовать родословную и указать фамилии, имена, отчества и дату рождения для всех членов семьи, у которых был осуществлен забор крови. Подробнее...
Эпителий со внутренней поверхности щеки
Для некоторых видов анализа пригодна ДНК, выделенная из клеток букального эпителия, собранных на зонд или ватную палочку. Не подходит для детей младше 6 мес.
Слюна
В некоторых случаях возможно провести тест материала, полученного из слюны, однако этот способ является наименее точным и подходит не во всех случаях.
Кадаверный материал
В случае недоступности человека для исследования, возможно выделение ДНК из секционного материала (парафиновых блоков), ногтей.
