ПДРФ-анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов RFLP - Restriction Fragment Length Polymorphism
Анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов, так называемый ПДРФ-анализ (Restriction Fragment Length Polymorphism - RFLP analysis) включает следующие этапы: выделение геномной ДНК, ее рестрикцию специфической эндонуклеазой, элекрофоретическое разделение образующихся фрагментов ДНК и идентификацию фрагментов ДНК, содержащих полиморфный сайт рестрикции, путем блот-гибридизации по Саузерну.
Полное расщепление анализируемой геномной ДНК отдельными рестриктазами приводит к образованию определенного набора фрагментов ДНК, число и размеры которых соответствуют расположению сайтов рестрикции. Гибридизация по Саузерну позволяет определять размеры и взаимное расположение рестрикционных фрагментов ДНК после их электрофоретического разделения.Мутационная изменчивость в сайтах рестрикции может быть легко обнаружена по изменению длины рестрикционных фрагментов ДНК, гибридизующихся со специфическими ДНК-зондами. При наличии мутации в одном из сайтов рестрикции этот сайт остается нерасщепленным после завершения рестрикции, что приводит к слиянию соседних рестрикционных фрагментов ДНК, разделяемых мутантным сайтом, и образованию фрагмента ДНК большего размера. В результате длина рестрикционных фрагментов ДНК, содержащих мутантные сайты, становится полиморфной, что выявляется при сравнении ДНК из разных источников методом ПДРФ.
Типы генетической диагностики в офтальмологии:
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Кариотипирование |
флюоресцентная гибридизация in situ, Fluorescence in situ hybridization |
Спектральный кариотип spectral karyotype |
SSDGE в генетике - single-strand DNA gel electrophoresis (электрофорез в геле одноцепочечной ДНК) |
DGGE - denaturing gradient gel electrophoresis денатурирующего градиентного гель-электрофореза |
анализ полиморфизма длины рестрикционных фрагментов Restriction Fragment Length Polymorphism |
Специфичный микрочип |
Типичный микрочип |
Прямое секвенирование |
|
